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2017年臨床檢驗(yàn)技師臨床免疫學(xué)備考考點(diǎn)
導(dǎo)語：雖然酶大多是蛋白質(zhì)，但少數(shù)具有生物催化功能的分子并非為蛋白質(zhì)，有一些被稱為核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通過人工合成所謂人工酶也具有與酶類似的催化活性，包括人工合成的DNA。一起來看看吧。
1.免疫組織化學(xué)技術(shù)：
又稱免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，是指用標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)免疫檢測(cè)方法。
種類： 熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)、酶免疫組織化學(xué)技術(shù)、免疫金(銀)組織化學(xué)技術(shù)、親和組織化學(xué)技術(shù)、免疫電競(jìng)組織化學(xué)技術(shù)等
基本過程：
1.抗原的提取和純化
2.免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化
3.將標(biāo)記物與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體
4.標(biāo)本的處理與制備
5.抗原抗體免疫學(xué)反應(yīng)以及標(biāo)記物呈色反應(yīng)
6.觀察結(jié)果
2.非標(biāo)記抗體酶免疫組織化學(xué)染色
【技術(shù)類型】
(一)酶橋法
抗酶抗體作為第三抗體，通過橋抗體(第二抗體)將特異性識(shí)別組織抗原的第一抗體連接，形成酶聯(lián)的 抗原-抗體 復(fù)合物，加底物顯色。
本法較酶標(biāo)法的敏感性有所提高，但操作分四步較為復(fù)雜。
(二)過氧化物酶抗過氧化物酶酶(PAP)法
是在酶橋法的基礎(chǔ)上加以改良。本法首先將酶橋法的第三抗體(抗酶抗體)與酶組成可溶性復(fù)合物(PAP復(fù)合物)。該復(fù)合物由兩個(gè)抗酶抗體和三個(gè)過氧化物酶分子組成，呈五角形結(jié)構(gòu)，非常穩(wěn)定。
通過橋抗體(第二抗體)，將特異性識(shí)別組織抗原的第一抗體與PAP復(fù)合物的抗酶抗體連接起來，此時(shí)要求特異性第一抗體與第三抗體的動(dòng)物種屬相同
(三)雙橋PAP法
該法建立在PAP法的基礎(chǔ)上。其基本原理是在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP復(fù)合物而建立起來的，通過雙橋可結(jié)合更多的PAP復(fù)合物于抗原分子上，以增強(qiáng)敏感性。這種放大方式重復(fù)使用橋抗體，使橋抗體與PAP復(fù)合物中抗酶抗體的未飽和Fc段結(jié)合，或橋抗體與特異性第一抗體未飽和的Fc段結(jié)合。如此對(duì)抗原有明顯放大作用，對(duì)于組織細(xì)胞微量抗原的檢測(cè)又實(shí)用價(jià)值。
(四)堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法(APAAP)法
因部分組織細(xì)胞內(nèi)含內(nèi)源性過氧化物酶，限制了HRP的廣泛應(yīng)用，需選用其他酶免疫組織化學(xué)反應(yīng)。本法是用堿性磷酸酶(ALP)代替HRP建立的堿性磷酸酶(ALP)-抗堿性磷酸酶(AAP)法，簡稱APAAP。其技術(shù)要點(diǎn)與PAP法相似。
【常用酶及顯色底物】
最常用的是辣根過氧化物酶(HRP)，常用的供氫體有二氨基聯(lián)苯胺(DAB)，反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色。其他有：氨基乙基卡巴唑(AEC)，反應(yīng)產(chǎn)物為橘紅色;4-氯-1-萘酚，反應(yīng)產(chǎn)物為灰藍(lán)色。
堿性磷酸酶為磷酸酯的水解酶，可通過兩種反應(yīng)顯色：①偶氮偶聯(lián)反應(yīng)，最終與重氮化合物作用生成不溶沉淀，如快藍(lán)為深藍(lán)色，快紅為紅色。②靛藍(lán)四唑反應(yīng)，最終形成紫藍(lán)色不溶沉淀。
3.親和組織化學(xué)類型： 生物素-親和素法(親和素-生物素-過氧化酶復(fù)合物技術(shù)ABC、橋聯(lián)親和素-生物素技術(shù)BRAB、標(biāo)記親和素-生物素技術(shù)LAB)、葡萄球菌蛋白A法、凝集素法、鏈霉親和素-生物素法。
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